土壤β-木糖苷酶測定試劑盒說明書

更新時間：2025-01-13

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土壤β-木糖苷酶（Solid-β- xylosidase, S-β-XYS）測定試劑盒說明書

微量法 100T/48S

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細(xì)菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類半纖維素降解的關(guān)鍵酶，產(chǎn)物木糖可作為碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵。另外，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應(yīng)用于造紙工業(yè)，比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保，具有廣泛的應(yīng)用價值。

測定原理：

S-β-XYS 催化對硝基苯酚-β-D-木糖苷產(chǎn)生對硝基苯酚，對硝基苯酚在 405nm 處有特征吸收峰，測定405nm 光吸收增加速率，可計(jì)算S-β-XYS 活性。

組成：

產(chǎn)品名稱	BO6095-100T/48S	Storage
提取液：液體	100ml	4℃
試劑一：液體	1ml	4℃避光
試劑二：液體	10ml	4℃
試劑三：液體	10ml	4℃
說明書	一份

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。

粗酶液提取：

約 0.1g 鮮土或風(fēng)干土樣，加入 1ml 提取液進(jìn)行冰浴勻漿，室溫振蕩提取 30min，然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清待測。

測定操作表：

1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長至 405nm。

2、操作表

	對照管	測定管
樣本（μl）	40	40

試劑一（μl）		10
試劑二（μl）	80	70
混勻，45℃水浴 20min
試劑三（μl）	80	80
混勻，靜置 5min，405nm 處測定吸光值A，計(jì)算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。

β-木糖苷酶活性計(jì)算公式：

a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=13.226x+0.0011，R²=0.9998；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y 為吸光值ΔA。酶活定義：每克土樣每天催化產(chǎn)生 1μmol 對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性（μmol/d /g 土樣）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T

=16.33×(ΔA-0.0011)÷W

V 樣總：加入提取液體積，1ml； V 反總：反應(yīng)總體積，0.12ml；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04ml； W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，20min=1/72d；

b. 用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=6.613x+0.0011，R²=0.9998；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y 為吸光值ΔA酶活定義：每克土樣每天催化產(chǎn)生 1μmol 對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性（μmol/d /g 土樣）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T

=32.66×(ΔA-0.0011)÷W

ΔA 控制在 0.01-1 范圍內(nèi)，若ΔA 大于 1，可適當(dāng)減小樣本量。標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為：0.01μmol/ml-0.5μmol/ml。

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